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【實驗原理】
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。
【應(yīng)用簡介】
基因組原位雜交主要是利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當?shù)臐舛茸鞣庾?,在靶染色體上進行原位雜交。
熒光原位雜交利用熒光標記的核酸片段為探針,與染色體上的DNA雜交,通過熒光檢測系統(tǒng)(熒光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列,進而確定其雜交位點。
多彩色熒光原位雜交是用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同。
【實驗流程】
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1、RNA探針長度以50-150bp為佳,探針已進入細胞,雜交率高,雜交時間短。
2、原位雜交反應(yīng)中探針濃度應(yīng)超過靶序列的濃度,探針濃度必須給予該實驗最大信噪比,因為背景著色度高低與探針濃度有關(guān)。
3、雜交溫度應(yīng)低于解鏈或溶解溫度20-30℃。雜交反應(yīng)的時間可隨探針濃度的增加而縮短,雜交時間過短會造成雜交不完全,雜交時間過長會增加非特異性著色。
4、組織固定或蔗糖脫水不好會使組織有較多的空泡。
【服務(wù)流程】