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【實驗原理】
利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學發(fā)光反應的特性,把感興趣的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因(firefly luciferase)的上游, 構(gòu)建成熒光素酶報告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細胞,適當刺激或處理后裂解細胞,測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調(diào)控元件的影響。
【應用簡介】
雙熒光素酶實驗通常用于以下研究方向:驗證miR同mRNA靶向互作、驗證miR同lncRNA靶向互作、啟動子結(jié)構(gòu)分析、驗證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用等。
主要應用領域
1、潛在啟動子/啟動子核心區(qū)域檢測;
2、潛在增強子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測;
3、啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點檢測;
4、啟動子/增強子與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用;
5、病毒/細胞相互作用;
6、藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)(抑制或增強);
7、射線等物理誘導因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)(抑制或增強)。
【實驗方法】
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1、由于溫度對酶反應有影響,所以測定時樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
2、Renilla熒光素酶檢測工作液后需配制后立即使用,不可配制成工作液后長期保存。
3、Luciferase Assay Reagent II (LAR II)不能反復凍融,保證每次用同一批次的LAR II。配好的LAR II在-20度可穩(wěn)定一個月,在-70度 可穩(wěn)定一年。
4、試劑保存和使用時都應避光。
5、為取得最佳測定效果,測定時,樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應盡量控制在相同時間內(nèi)(1-2秒)。
6、使用過程中切勿接觸操作屏(程序會被終止或取消)。
7、平時盡量不要移動儀器,防止觸摸屏走位。
【服務流程】