2022-06-09 10:07:19

腺病毒包裝

一、實(shí)驗(yàn)原理

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二、應(yīng)用簡介

腺病毒（Adenovirus）是一種沒有包膜的直徑為70～90 nm的病毒顆粒，為線狀雙鏈DNA分子，約含35000 bp，兩端各有長約100 bp的反向重復(fù)序列。

實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的腺病毒為5型血清型腺病毒，缺失了腺病毒的早期表達(dá)基因序列E1區(qū)和E3區(qū)。E1是腺病毒復(fù)制所必須的，E1的缺失使其不能自身復(fù)制，只能依靠包裝細(xì)胞如HEK293細(xì)胞提供的反式互補(bǔ)進(jìn)行復(fù)制擴(kuò)增，以此保證腺病毒的安全性。E3基因表達(dá)的蛋白能對抗宿主的抗病毒防御系統(tǒng)，E3區(qū)的去除能減少宿主的體內(nèi)免疫反應(yīng)。

腺病毒包裝采用的是最新的AdMax系統(tǒng)，通過Cre-loxp重組酶，使共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中的腺病毒載體穿梭質(zhì)粒和骨架質(zhì)粒（腺病毒基因組質(zhì)粒）在重組酶的作用下產(chǎn)生重組腺病毒，獲得的病毒滴度更高，其病毒滴度可以達(dá)到1×10^12pfu/ml 。

腺病毒載體有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多種啟動(dòng)子可供選擇；而且還有EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等多種熒光標(biāo)記蛋白可供選擇。

三、實(shí)驗(yàn)方法

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