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科研技術服務
一、實驗原理
Southern blot又稱凝膠電泳壓印雜交技術,該方法利用硝酸纖維膜或濾紙或尼龍膜等具有吸附DNA的功能,先將DNA片段作凝膠電泳,并將電泳后的DNA區(qū)帶吸附到膜上,然后直接在膜上進行同位素標記探針與被測DNA之間的雜交,最后通過放射自顯影對雜交結果進行檢測,以此探測一個DNA樣品中含有的特定DNA序列。
二、應用簡介
技術應用
1、定性及定量分析基因組中特定基因；
2、基因突變分析及限制性片段長度多態(tài)性分析。
應用范圍
1.遺傳病診斷：傳統的基因診斷技術主要是以基因探針技術為基礎而建立的一些檢測方法-Southern blot。
2.DNA圖譜分析：a.高度的特異性；b.穩(wěn)定的遺傳性；c.體細胞穩(wěn)定性
3.檢測樣品中的DNA及其含量
4.PCR產物分析
三、 實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、核酸質量對southern雜交實驗的影響
答：核酸質量對實驗的影響是直接的，既要求客戶提供的總量足夠——實驗消耗（上樣量），又要求保證質量——按要求準備材料。
DNA樣品一般對OD值和濃度有如下要求：OD260/280=1.8～2.0，OD260/230＞2.0，濃度≥100 ng/ul。同時，需要對DNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結果顯示該DNA樣品無蛋白質和RNA等物質污染，無降解彌散，條帶清晰。
2、探針設計是怎么回事，有哪些原則？
答：探針就是與待測目的基因序列同源的一段地高辛標記的DNA序列，可以和酶切后的基因組片段特異性的結合。 探針設計有如下幾個原則:
(1)、長度適中。探針的片段長度一般控制在300-1000bp，探針太長時會導致非特異性結合的概率增加，探針太短時，探針結合的地高辛標記物太少，會導致發(fā)光信號減弱。
(2)、特異性強。最佳的探針序列是僅與目的基因同源，與整個基因組序列的同源片段低于30%。
(3)、ATGC含量均勻，無發(fā)卡結構和高度重復序列。
3、基因組片段化時使用限制性內切酶是怎么選擇的？
答：(1)、目的基因序列中不能含有該位點
(2)、常用的內切酶，價格優(yōu)惠、酶切效率高
(3)、預實驗可以把基因組片段化，電泳檢測彌散狀態(tài)看不到明顯的主帶。
(4)、根據轉化載體上的酶切位點選擇
4、如何減少非特異的曝光條帶？
我們采用PCR法合成雙鏈的地高辛標記的探針，電泳檢測探針是否標記成功，若條帶單一，且略大于對照組，則認為探針合成成功（如圖3所示）。
此外，和合成探針前，需要在NCBI上比對探針序列，若沒有在待測物種中Blast到高同源性的序列，則認為該探針是特異的。6、檢測結果陰性有哪些因素造成的？
答：在southern雜交服務中，大概總結為一下幾類原因：
(1)、基因組中目的基因豐度很低，低于southern blot雜交實驗的檢測下限（目的基因的量低于0.1pg）
(2)、在該物種基因組信息不全的狀態(tài)下，探針序列特異性很難保證，結果出現大量的非特異性條帶。
(3)、基因組質量達不到要求
(4)、待測樣品的確為陰性
(5)、酶切方案的影響
七、服務流程
